Plásmido CRISPR de Activación (m) GalNAc-T6: sc-431525-ACT

Galnt6 codifica la polipeptídica N-acetilgalactosaminiltransferasa 6 (GalNAc-T6), una enzima iniciadora residente en el aparato de Golgi para la O-glicosilación de tipo mucina, que transfiere GalNAc a residuos de Ser/Thr en proteínas secretadas y de membrana. Al establecer sitios de O-glicanos en mucinas y otras glucoproteínas, GalNAc-T6 influye en el plegamiento proteico, la susceptibilidad a proteasas, la organización de receptores y las interacciones con la matriz extracelular que modulan la adhesión celular, la motilidad y la transducción de señales. Los patrones alterados de O-glicosilación se asocian con frecuencia a la remodelación epitelial y a microambientes inflamatorios, lo que convierte a Galnt6 en un nodo relevante para estudiar la regulación del glucoproteoma en contextos vinculados a enfermedad. En modelos murinos, la modulación de la actividad de Galnt6 puede utilizarse para investigar cómo el inicio de la O-glicosilación afecta a la homeostasis tisular y a la capacidad de respuesta de las vías de señalización.

GalNAc-T6 El plásmido de activación CRISPR (m) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de Galnt6 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

GalNAc-T6 El plásmido de activación CRISPR (m) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus Galnt6 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional Galnt6, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de GalNAc-T6. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo Galnt6 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de GalNAc-T6 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía GalNAc-T6 en células tumorales con expresión de Galnt6 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.