galectin-9 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-421420

Panoramica

Lgals9 nel topo codifica la galectina-9, una lectina legante i β-galattosidi che svolge un ruolo nelle interazioni cellula–cellula e cellula–matrice dipendenti dai glicani e modula la segnalazione immunitaria e infiammatoria. La galectina-9 regola l’attivazione, l’adesione e il traffico dei leucociti ed è collegata a vie che controllano le risposte citochiniche, la regolazione delle cellule T e la polarizzazione delle cellule mieloidi. Grazie ai suoi ruoli nell’immunoregolazione e nell’omeostasi tissutale, Lgals9 è spesso studiato in modelli di autoimmunità, infezione, allergia e immunologia dei tumori, nonché in contesti di fibrosi e infiammazione cronica. Un’alterata espressione della galectina-9 è stata inoltre associata a cambiamenti nella suscettibilità all’apoptosi e nelle risposte allo stress che influenzano microambienti rilevanti per la malattia.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO galectin-9 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Lgals9 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Lgals9 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Lgals9 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina galectin-9.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Lgals9 per lo studio della segnalazione di galectin-9, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Lgals9 critici per la funzione di galectin-9
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Lgals9 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal galectin-9 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal galectin-9 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Lgals9. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal galectin-9 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR galectin-9 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Lgals9 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Lgals9 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.