G3BP1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-424175

Panoramica

G3bp1 codifica G3BP1, una proteina legante l’RNA che avvia l’assemblaggio dei granuli di stress e coordina la selezione (“triage”) degli mRNA durante lo stress cellulare. Attraverso interazioni con fattori di inizio della traduzione e componenti di segnalazione, G3BP1 collega le risposte allo stress a vie che regolano la stabilità degli mRNA, la segnalazione dell’immunità innata e l’apoptosi, includendo interazioni reciproche con programmi associati a MAPK e interferone. Nei sistemi murini, G3BP1 è comunemente studiata per i suoi ruoli nella restrizione antivirale e nella modulazione della segnalazione infiammatoria, oltre che per effetti più ampi sulla proteostasi e sulle decisioni di destino cellulare. In modelli sperimentali, un’alterata dinamica dei granuli di stress che coinvolge G3BP1 è stata associata a fenotipi di neurodegenerazione e correlati al cancro, a supporto della sua rilevanza per la ricerca sui meccanismi di malattia.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO G3BP1 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene G3bp1 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del G3bp1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto G3bp1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina G3BP1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di G3bp1 per lo studio della segnalazione di G3BP1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni G3bp1 critici per la funzione di G3BP1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di G3bp1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal G3BP1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal G3BP1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus G3bp1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal G3BP1 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR G3BP1 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia G3bp1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio G3bp1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.