FRRS1L Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-407611

Panoramica

FRRS1L (ferric chelate reductase 1 like) codifica una proteina associata al reticolo endoplasmatico, implicata nella biogenesi e nella regolazione funzionale dei recettori del glutammato di tipo AMPA, influenzando la trasmissione sinaptica eccitatoria e l’attività delle reti neuronali. FRRS1L partecipa a processi che governano l’assemblaggio del recettore, il traffico intracellulare e l’espressione sulla superficie cellulare, incidendo così sulle vie di segnalazione legate alla plasticità sinaptica. L’alterazione della funzione di FRRS1L è stata associata a fenotipi neuroevolutivi ed epilettici, rendendolo rilevante per lo studio dei meccanismi di sinaptopatia e della disfunzione neuronale dipendente dall’attività. Il suo arricchimento nei neuroni e il ruolo nella segnalazione glutammatergica ne supportano l’impiego per modellare, a livello di circuito, le conseguenze di un’omeostasi recettoriale alterata.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO FRRS1L (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene FRRS1L in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del FRRS1L insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto FRRS1L a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina FRRS1L.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di FRRS1L per lo studio della segnalazione di FRRS1L, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni FRRS1L critici per la funzione di FRRS1L
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di FRRS1L per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal FRRS1L CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal FRRS1L CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus FRRS1L. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal FRRS1L Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR FRRS1L (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia FRRS1L per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio FRRS1L definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.