FRP-3 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-402504-ACT

Il gene umano **FRZB** codifica la **proteina 3 correlata a Frizzled (FRP-3)**, un antagonista secreto dei ligandi Wnt che modula l’attivazione dei recettori Frizzled e la trascrizione a valle dipendente da **β-catenina**. Modellando i gradienti di Wnt, FRP-3 influenza le decisioni di destino cellulare, la proliferazione e l’omeostasi della matrice extracellulare durante lo sviluppo e nei tessuti adulti, inclusi cartilagine e tessuto connettivo. Alterazioni dell’espressione o della funzione di FRZB sono state associate a una deregolazione della segnalazione Wnt nella biologia muscoloscheletrica e in vie correlate ai tumori, rendendolo rilevante per studi su osteoartrosi, sviluppo scheletrico e comportamento delle cellule tumorali. L’attività di FRP-3 interseca inoltre il crosstalk con BMP/TGF-β e i programmi di rimodellamento della matrice che influenzano l’organizzazione e la differenziazione tissutale.

FRP-3 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di FRZB senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

FRP-3 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus FRZB nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione FRZB, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di FRP-3. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus FRZB nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da FRP-3 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via FRP-3 nelle cellule tumorali con espressione di FRZB silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.