FOXL2 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-403351

Panoramica

FOXL2 è un fattore di trascrizione della famiglia forkhead box che svolge un ruolo centrale nella differenziazione delle cellule della granulosa, nella follicologenesi ovarica e nel mantenimento dell’identità ovarica. Legandosi a elementi cis-regolatori e coordinando programmi trascrizionali associati alla cromatina, FOXL2 integra input di segnalazione che modulano la steroidogenesi, il controllo del ciclo cellulare e l’apoptosi nei tessuti riproduttivi. Un’attività dis-regolata di FOXL2 altera le reti geniche dello sviluppo ed è fortemente associata a disordini dello sviluppo sessuale e a patologie ovariche, incluse alterazioni somatiche ricorrenti osservate nei tumori a cellule della granulosa di tipo adulto. In quanto regolatore nucleare con funzioni determinanti per la specificazione di linea, FOXL2 è ampiamente studiato nei percorsi che governano l’endocrinologia riproduttiva, la regolazione trascrizionale e la biologia tumorale tessuto-specifica.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO FOXL2 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene FOXL2 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del FOXL2 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto FOXL2 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina FOXL2.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di FOXL2 per lo studio della segnalazione di FOXL2, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni FOXL2 critici per la funzione di FOXL2
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di FOXL2 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal FOXL2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal FOXL2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus FOXL2. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal FOXL2 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR FOXL2 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia FOXL2 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio FOXL2 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.