FOXJ1 Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-402226-LAC

Il gene umano **FOXJ1** codifica un fattore di trascrizione della famiglia forkhead box che funge da regolatore principale della ciliogenesi motile e della differenziazione delle cellule epiteliali. FOXJ1 coordina programmi trascrizionali che controllano l’ancoraggio dei corpi basali, l’assemblaggio dell’assonema e l’espressione dei bracci di dineina, integrandosi con reti di segnalazione dello sviluppo come Notch e Wnt per stabilire il destino delle cellule ciliate. Attraverso il suo ruolo nella formazione delle ciglia delle vie aeree e delle cellule ependimali, un’alterata attività di FOXJ1 è associata a una compromissione della clearance mucociliare e a una disregolazione del flusso del liquido cerebrospinale, processi rilevanti per fenotipi simili alla discinesia ciliare primaria e per altre ciliopatie. FOXJ1 è inoltre utilizzato come marcatore e come nodo funzionale per lo studio degli epiteli multiciliati, della specificazione di linea e del controllo trascrizionale delle reti geniche ciliarie.

Le particelle di attivazione lentivirale FOXJ1 (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di FOXJ1 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale FOXJ1 (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione FOXJ1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di FOXJ1. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo FOXJ1 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.