FOXI1 Plasmide di attivazione CRISPR (m): sc-420369-ACT

Foxi1 codifica il fattore di trascrizione della famiglia forkhead box FOXI1, un regolatore nucleare che contribuisce a determinare il destino delle cellule epiteliali e controlla programmi genici necessari per il trasporto di ioni e l’omeostasi acido–base. Nel topo, l’attività di FOXI1 è strettamente legata alla differenziazione e alla funzione delle cellule intercalate nel dotto collettore renale e allo sviluppo dell’epitelio dell’orecchio interno, influenzando l’espressione di trasportatori e canali coinvolti nella regolazione del pH. Attraverso queste reti trascrizionali, Foxi1 si interseca con vie che governano la maturazione epiteliale, il trasporto di membrana e l’omeostasi tissutale. La disregolazione dei programmi dipendenti da FOXI1 è rilevante per la ricerca sulla disfunzione tubulare renale e sulla biologia dell’udito neurosensoriale, in cui un’alterata specificazione epiteliale e l’espressione dei trasportatori possono contribuire a fenotipi associati a malattia.

FOXI1 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di Foxi1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

FOXI1 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus Foxi1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione Foxi1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di FOXI1. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus Foxi1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da FOXI1 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via FOXI1 nelle cellule tumorali con espressione di Foxi1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.