FOXF2 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-420374

Panoramica

Forkhead box F2 (Foxf2) codifica il fattore di trascrizione FOXF2, un regolatore arricchito nel mesenchima dei programmi genici dello sviluppo che modellano il patterning tissutale, l’organizzazione della matrice extracellulare e la segnalazione epitelio–mesenchima. Nel topo, l’attività di Foxf2 contribuisce all’organogenesi e alla differenziazione dello stroma controllando reti trascrizionali a valle di segnali morfogenetici, incluse vie associate alla segnalazione TGF-β/BMP, alla modulazione di Wnt e al rimodellamento del citoscheletro/della matrice extracellulare (ECM). In letteratura, una trascrizione dipendente da FOXF2 deregolata è stata collegata ad alterazioni del comportamento dei fibroblasti, a un’architettura tissutale aberrante e a cambiamenti nei compartimenti stromali associati alla barriera e al sistema vascolare, a supporto della sua rilevanza in fenotipi di rimodellamento pertinenti alla malattia. In quanto nodo della regolazione genica dello sviluppo e dello stroma, Foxf2 è spesso studiato in contesti quali risposte simili alla fibrosi, interazioni tumore–stroma e anomalie dello sviluppo in modelli murini.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO FOXF2 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Foxf2 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Foxf2 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Foxf2 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina FOXF2.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Foxf2 per lo studio della segnalazione di FOXF2, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Foxf2 critici per la funzione di FOXF2
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Foxf2 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal FOXF2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal FOXF2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Foxf2. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal FOXF2 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR FOXF2 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Foxf2 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Foxf2 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.