FOXF1 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-403521-ACT

FOXF1 (forkhead box F1) codifica un fattore di trascrizione “winged-helix” che regola la differenziazione mesenchimale e l’organogenesi, con ruoli di primo piano nello sviluppo polmonare e vascolare. Nel nucleo, FOXF1 coordina programmi genici che controllano la migrazione cellulare, il rimodellamento della matrice extracellulare e le reti trascrizionali associate alla muscolatura liscia/ai periciti, integrando input di segnalazione dello sviluppo come l’attività delle vie Hedgehog e TGF-β. Alterazioni del dosaggio di FOXF1 o perturbazioni regolatorie sono collegate a patologie congenite di polmone e vasi, e un’espressione aberrante è stata studiata in contesti di rimodellamento tissutale e di biologia dello stroma associato al cancro. Queste caratteristiche rendono FOXF1 un nodo utile per analizzare i circuiti trascrizionali che governano le transizioni di stato delle cellule mesenchimali e le interazioni epitelio–mesenchimali.

FOXF1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di FOXF1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

FOXF1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus FOXF1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione FOXF1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di FOXF1. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus FOXF1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da FOXF1 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via FOXF1 nelle cellule tumorali con espressione di FOXF1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.