FOXF1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403521-ACT

FOXF1 (forkhead box F1) codifica um fator de transcrição do tipo hélice-alada (winged-helix) que regula a diferenciação mesenquimal e a organogênese, com papéis de destaque no desenvolvimento pulmonar e vascular. No núcleo, o FOXF1 coordena programas gênicos que controlam a migração celular, a remodelação da matriz extracelular e redes transcricionais associadas a músculo liso/pericitos, integrando sinais de desenvolvimento como a atividade das vias Hedgehog e TGF-β. Alterações na dosagem de FOXF1 ou disrupções regulatórias estão ligadas a doenças congênitas do pulmão e dos vasos, e sua expressão aberrante tem sido estudada em contextos de remodelação tecidual e biologia do estroma associada ao câncer. Essas características tornam o FOXF1 um nó útil para dissecar circuitos transcricionais que governam transições de estado de células mesenquimais e interações epitélio–mesênquima.

FOXF1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de FOXF1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

FOXF1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus FOXF1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição FOXF1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de FOXF1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus FOXF1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de FOXF1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via FOXF1 em células tumorais com expressão de FOXF1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.