FOXE3 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-404466-ACT

FOXE3 (forkhead box E3) codifica um fator de transcrição do tipo forkhead/winged-helix que regula programas de expressão gênica necessários para o desenvolvimento ocular, particularmente a formação da placoda do cristalino, a manutenção do epitélio do cristalino e a diferenciação. Por meio de ligação ao DNA específica de sequência, o FOXE3 coordena redes transcricionais que influenciam o controle do ciclo celular, a identidade epitelial e o comprometimento de linhagem em tecidos do segmento anterior. A desregulação da função de FOXE3 e variantes genéticas estão associadas a distúrbios oculares congênitos, incluindo disgênese do segmento anterior, microftalmia e fenótipos associados a catarata, tornando-o um alvo relevante para estudar o controle transcricional do desenvolvimento. Assim, o FOXE3 é amplamente utilizado como uma ferramenta molecular para modelar a biologia do cristalino e mapear reguladores a montante e efetores a jusante da sinalização mediada por fatores forkhead.

FOXE3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de FOXE3 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

FOXE3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus FOXE3 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição FOXE3, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de FOXE3. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus FOXE3 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de FOXE3 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via FOXE3 em células tumorais com expressão de FOXE3 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.