FOXD1 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-402521-ACT

FOXD1 (forkhead box D1) è un fattore di trascrizione della famiglia forkhead che regola i programmi di specificazione del destino cellulare, proliferazione e differenziamento durante lo sviluppo embrionale, con ruoli di rilievo nella morfogenesi renale e nel patterning delle linee stromali. Legandosi ai motivi forkhead del DNA, FOXD1 coordina reti trascrizionali che interagiscono con vie di segnalazione dello sviluppo come WNT, TGF-β e la segnalazione MAPK/PI3K guidata dai fattori di crescita, contribuendo a modellare l’architettura dei tessuti. Un’espressione deregolata di FOXD1 è stata associata ad alterazioni delle interazioni epitelio–stroma, al rimodellamento della matrice extracellulare e a fenotipi cellulari invasivi in diversi contesti tumorali, rendendolo un nodo utile per studiare il controllo trascrizionale dei programmi del microambiente tumorale. Inoltre, i circuiti di regolazione genica legati a FOXD1 sono rilevanti per investigare disturbi dello sviluppo e stati trascrizionali specifici di linea nelle cellule umane.

FOXD1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di FOXD1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

FOXD1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus FOXD1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione FOXD1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di FOXD1. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus FOXD1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da FOXD1 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via FOXD1 nelle cellule tumorali con espressione di FOXD1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.