Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
FLG/Filaggrin Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-400644
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- FLG/Filaggrin Il plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) è un pool di plasmidi, ciascuno dei quali codifica la nucleasi Cas9 e un RNA guida (gRNA) specifico per il bersaglio di 20 nt, progettato per la massima efficienza di knockout utilizzando sequenze derivate dalla libreria GeCKO v2
- Le sequenze gRNA indirizzano Cas9 a indurre rotture a doppio filamento (DSB) sito-specifiche nel locus genomico FLG/Filaggrin, con conseguente knockout genico tramite giunzione non omologa (NHEJ)
- I geni di resistenza alla puromicina e RFP sono fiancheggiati da siti LoxP, consentendo la rimozione dei marcatori di selezione tramite la ricombinasi Cre (Cre Vector: sc-418923) dopo aver stabilito linee cellulari knockout stabili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: FLG/Filaggrin Antibody (AKH1): sc-66192
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
FLG/Filaggrin Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h) | sc-400644 | 20 µg | $397.00 |
Panoramica
FLG codifica la filaggrina, una proteina chiave della differenziazione epidermica prodotta come profilaggrina nei granuli di cheratoialina e processata in ripetizioni di filaggrina che aggregano i filamenti intermedi di cheratina durante la maturazione terminale dei cheratinociti. I prodotti di degradazione della filaggrina contribuiscono al fattore idratante naturale (natural moisturizing factor), sostenendo l’idratazione dello strato corneo, l’omeostasi del pH e l’integrità della barriera cutanea. Attraverso queste funzioni, FLG si intreccia con la formazione dell’involucro corneo, l’organizzazione lipidica e la segnalazione infiammatoria legata allo stress di barriera. Varianti loss-of-function o una ridotta espressione sono associate a fenotipi di barriera cutanea compromessa e sono ampiamente studiate nei modelli di dermatite atopica e ittiosi volgare.
Il plasmide CRISPR/Cas9 KO FLG/Filaggrin (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene FLG in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del FLG insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.
Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto FLG a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina FLG/Filaggrin.
Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di FLG per lo studio della segnalazione di FLG/Filaggrin, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.
Caratteristiche principali
- sgRNA mirati agli esoni FLG critici per la funzione di FLG/Filaggrin
Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di FLG per migliorare l'efficienza del knockout
Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione
Varianti di progettazione
CRISPR +/- HDR
- Gli gRNA codificati dal FLG/Filaggrin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal FLG/Filaggrin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus FLG. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
I costrutti donatori HDR codificati dal FLG/Filaggrin Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR FLG/Filaggrin (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia FLG per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio FLG definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.