FIG4 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-404404

Panoramica

FIG4 codifica una 5-fosfatasi dei fosfoinositidi che regola il turnover del fosfatidilinositolo 3,5-bisfosfato e di lipidi correlati sulle membrane endolisosomiali. Attraverso la sua partecipazione ai complessi regolatori PIKfyve–VAC14–FIG4, FIG4 influenza il traffico dagli endosomi ai lisosomi, l’autofagia, il riciclo di membrana e il mantenimento dell’omeostasi lisosomiale. L’alterazione dell’attività di FIG4 compromette la dinamica endolisosomiale e le risposte cellulari allo stress, processi centrali per il mantenimento dei neuroni e l’integrità della mielina. Studi genetici nell’uomo collegano la disfunzione di FIG4 a fenotipi neurodegenerativi e del neurosviluppo, a sostegno della sua importanza nelle vie di traffico di membrana rilevanti per la biologia del sistema nervoso.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO FIG4 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene FIG4 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del FIG4 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto FIG4 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina FIG4.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di FIG4 per lo studio della segnalazione di FIG4, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni FIG4 critici per la funzione di FIG4
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di FIG4 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal FIG4 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal FIG4 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus FIG4. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal FIG4 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR FIG4 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia FIG4 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio FIG4 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.