Plásmido CRISPR de Activación (h) Fibronectin: sc-400082-ACT

FN1 codifica la fibronectina, una glicoproteína principal de la matriz extracelular que coordina la adhesión y migración celular, así como la remodelación tisular, mediante su unión a integrinas, colágeno y proteoglucanos de heparán sulfato. La fibronectina participa en las adhesiones focales y en la señalización de mecanotransducción, coordinando la dinámica del citoesqueleto de actina y regulando vías como FAK/SRC, la señalización por GTPasas Rho y la organización de la matriz extracelular impulsada por TGF-β. En biología humana, la expresión o deposición alterada de FN1 se asocia con una reparación de heridas desregulada, fibrosis, invasión de células tumorales y remodelación del microambiente estromal. Estas propiedades convierten a FN1 en un objetivo central para estudiar el ensamblaje de la matriz extracelular, la plasticidad epitelio-mesenquimal y las redes de señalización dependientes de integrinas.

Fibronectin El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de FN1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Fibronectin El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus FN1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional FN1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Fibronectin. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo FN1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Fibronectin en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Fibronectin en células tumorales con expresión de FN1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.