FHL-2 Plasmide Double Nickase (h): sc-402930-NIC

FHL2 codifica la proteina 2 con domini LIM “four-and-a-half” (FHL-2), un adattatore composto esclusivamente da domini LIM che si localizza nelle adesioni focali e nel nucleo per coordinare interazioni proteina–proteina, collegando la dinamica del citoscheletro al controllo trascrizionale. FHL-2 modula la segnalazione integrina/FAK, il rimodellamento dell’actina dipendente dalle GTPasi Rho e i programmi di meccano-trasduzione, e può influenzare gli output trascrizionali tramite interazioni con fattori quali β-catenina/TCF e altri regolatori specifici del contesto. Attraverso questi ruoli, FHL2 è associato a processi cellulari che includono adesione, migrazione, proliferazione e differenziamento. Un’espressione o un’attività disregolata di FHL2 è stata collegata ad alterazioni del rimodellamento tissutale e a stati di segnalazione oncogenica, a supporto della sua rilevanza negli studi su fibrosi, biologia cardiovascolare e comportamento delle cellule tumorali.

FHL-2 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus FHL2 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di FHL2. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di FHL2. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con FHL2 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.