FGFR-3 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400184-ACT

FGFR3 codifica o receptor 3 do fator de crescimento de fibroblastos (FGFR-3), uma tirosina-quinase receptora transmembranar que se liga a ligantes FGF para regular a proliferação celular, a diferenciação e a homeostase tecidual. Após a ativação, o FGFR-3 sinaliza por vias centrais, incluindo RAS–MAPK/ERK, PI3K–AKT, PLCγ e STAT, para modular programas transcricionais e decisões de destino celular. A atividade desregulada de FGFR3 tem sido implicada no desenvolvimento esquelético anormal e em diversos processos oncogênicos, e a sinalização alterada do receptor pode remodelar redes de feedback e de crosstalk dependentes de fatores de crescimento. Como nó de via, o FGFR-3 é amplamente utilizado para estudar o tráfego do receptor, a especificidade de ligante, a dinâmica de fosforilação e as respostas transcricionais a jusante.

FGFR-3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de FGFR3 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

FGFR-3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus FGFR3 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição FGFR3, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de FGFR-3. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus FGFR3 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de FGFR-3 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via FGFR-3 em células tumorais com expressão de FGFR3 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.