Fe65 Plasmide Double Nickase (h): sc-403226-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- Fe65 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il Fe65 Double Nickase Plasmid (h) e il Fe65 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira APBB1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: Fe65 Antibody (F-6): sc-398389
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
Fe65 Plasmide Double Nickase (h) | sc-403226-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Fe65 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-403226-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
APBB1 codifica Fe65, una proteina adattatrice che si lega alla coda citoplasmatica della proteina precursore dell’amiloide (APP) tramite i suoi domini di legame alla fosfotirosina e coordina complessi multiproteici coinvolti nella segnalazione neuronale. Fe65 partecipa al traffico endocitico, alla funzione sinaptica e alla regolazione dell’espressione genica attraverso interazioni con la macchina di processamento di APP e con co-regolatori nucleari. Queste attività collegano APBB1 a vie che governano la scissione di APP, la segnalazione intracellulare e la trascrizione dipendente dall’attività. Alterazioni delle interazioni Fe65–APP e della segnalazione a valle sono state studiate nel contesto della neurodegenerazione e del processamento amiloidogenico, a sostegno della sua rilevanza in modelli meccanicistici della malattia di Alzheimer e di neuropatologie correlate.
Fe65 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus APBB1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di APBB1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di APBB1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con APBB1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.