Fc ε RIγ Plasmide Double Nickase (h): sc-417621-NIC

FCER1G codifica la subunità di segnalazione FcεRIγ, un adattatore contenente un ITAM che si associa a molteplici recettori immunitari per collegare il riconoscimento del ligando a cascate di attivazione intracellulari. Nei contesti mieloidi e dei mastociti, FcεRIγ partecipa alla segnalazione dei recettori Fc e dei recettori lectinici di tipo C, promuovendo l’attivazione delle chinasi Src/Syk, il conseguente flusso di calcio, la segnalazione MAPK e programmi trascrizionali che regolano degranulazione, produzione di citochine e risposte fagocitiche. Attraverso queste vie, FcεRIγ contribuisce a plasmare le funzioni effettrici dell’immunità innata e quelle dipendenti dagli anticorpi, ed è frequentemente studiata nell’infiammazione allergica, nella biologia delle infezioni e nella disregolazione immunitaria. Alterazioni dell’espressione o della segnalazione tramite complessi recettoriali associati a FcεRIγ sono state correlate a fenotipi infiammatori e rappresentano un punto di accesso meccanicistico per analizzare gli stati di attivazione delle cellule immunitarie.

Fc ε RIγ Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus FCER1G nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di FCER1G. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di FCER1G. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con FCER1G interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.