Fatty Acid Synthase Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-400440-ACT

Il gene umano **FASN** codifica la **fatty acid synthase** (sintasi degli acidi grassi), un complesso enzimatico citosolico multifunzionale che catalizza la sintesi **de novo** di acidi grassi saturi a lunga catena, principalmente **palmitato**, a partire da **acetil-CoA** e **malonil-CoA** utilizzando **NADPH**. Questa attività si integra con il metabolismo dell’acetil-CoA, lo shuttle del citrato e le vie di produzione di NADPH per sostenere la biogenesi delle membrane, la palmitoilazione delle proteine e la segnalazione derivata dai lipidi. La regolazione di FASN è strettamente collegata al sensing dei nutrienti e a programmi trascrizionali lipogenici, incluso il controllo dipendente da **SREBP**, e contribuisce alle risposte cellulari all’ipossia e allo stress ossidativo tramite il rimodellamento lipidico. Alterazioni dell’espressione di FASN e della lipogenesi sono frequentemente studiate in contesti di disfunzione metabolica e di biologia delle malattie proliferative, in cui la disponibilità di lipidi può influenzare crescita, tolleranza allo stress e segnalazione infiammatoria.

Fatty Acid Synthase Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di FASN senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Fatty Acid Synthase Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus FASN nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione FASN, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Fatty Acid Synthase. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus FASN nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Fatty Acid Synthase nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Fatty Acid Synthase nelle cellule tumorali con espressione di FASN silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.