Fatso Plasmide Double Nickase (h): sc-403708-NIC

L’FTO umano (Fatso) codifica una demetilasi degli acidi nucleici dipendente da Fe(II)/2-ossoglutarato, che rimuove la N6-metiladenosina (m6A) e modificazioni metiliche correlate dall’RNA, influenzando così lo splicing, la stabilità e la traduzione dell’mRNA. Attraverso il controllo epitranscrittomico, FTO modula l’omeostasi energetica cellulare, l’adipogenesi e i programmi di sensing dei nutrienti, con effetti a valle su vie associate alla funzione mitocondriale e alle risposte allo stress metabolico. Varianti genetiche o un’espressione deregolata di FTO sono state associate al rischio di obesità e a fenotipi metabolici più ampi; inoltre, un’attività alterata di FTO è studiata in contesti che coinvolgono il controllo della crescita e la differenziazione cellulare. Queste caratteristiche rendono FTO un bersaglio ampiamente utilizzato per indagare, nelle cellule umane, la regolazione dell’espressione genica dipendente dalla metilazione dell’RNA.

Fatso Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus FTO nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di FTO. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di FTO. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con FTO interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.