FAM21C Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-404093

Panoramica

WASHC2C codifica FAM21C, un componente del complesso WASH che regola la polimerizzazione dell’actina dipendente da Arp2/3 sugli endosomi, supportando lo smistamento del carico mediato dal retromero e la tubulazione endosomiale. Attraverso interazioni con le sorting nexins e con subunità del retromero, FAM21C contribuisce al riciclo delle proteine di membrana e al mantenimento dell’omeostasi endolisosomiale. L’alterazione della funzione della via WASH può compromettere il traffico dei recettori, il riciclo dei trasportatori di nutrienti e gli output di segnalazione accoppiati alla dinamica endosomiale. Traffico endosomiale e regolazione del citoscheletro alterati sono implicati nella biologia dei tumori e in meccanismi neurodegenerativi, rendendo FAM21C rilevante per studi sull’organizzazione cellulare e sulle risposte allo stress.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO FAM21C (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene WASHC2C in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del WASHC2C insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto WASHC2C a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina FAM21C.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di WASHC2C per lo studio della segnalazione di FAM21C, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni WASHC2C critici per la funzione di FAM21C
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di WASHC2C per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal FAM21C CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal FAM21C CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus WASHC2C. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal FAM21C Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR FAM21C (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia WASHC2C per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio WASHC2C definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.