FAM122A Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-426886

Panoramica

Fam122a codifica FAM122A, una proteina regolatoria conservata implicata nel controllo dell’attività delle fosfatasi serina/treonina, in particolare tramite la modulazione dei complessi di PP2A. Influenzando la defosforilazione dipendente da PP2A, FAM122A può incidere su programmi di segnalazione guidati dalla fosforilazione, collegati alla progressione del ciclo cellulare, alle risposte al danno al DNA e a reti più ampie di proteostasi. La disregolazione di PP2A è ampiamente associata ad alterazioni del controllo della crescita e della segnalazione da stress, rendendo Fam122a un bersaglio utile per studi meccanicistici di vie incentrate sulle fosfatasi. Nei sistemi murini, la perturbazione di Fam122a consente di indagare come l’omeostasi della fosforilazione plasmi fenotipi cellulari rilevanti per la disregolazione della segnalazione associata a malattia.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO FAM122A (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Fam122a in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Fam122a insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Fam122a a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina FAM122A.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Fam122a per lo studio della segnalazione di FAM122A, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Fam122a critici per la funzione di FAM122A
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Fam122a per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal FAM122A CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal FAM122A CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Fam122a. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal FAM122A Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR FAM122A (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Fam122a per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Fam122a definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.