EYA4 Plasmide Double Nickase (h): sc-404355-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- EYA4 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il EYA4 Double Nickase Plasmid (h) e il EYA4 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira EYA4. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: EYA4 Antibody (E-11): sc-393111
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
EYA4 Plasmide Double Nickase (h) | sc-404355-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
EYA4 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-404355-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
EYA4 codifica un membro della famiglia Eyes Absent (EYA) di coattivatori trascrizionali e fosfatasi simili alle deialogenasi dell’acido haloacetico, che operano nella segnalazione nucleo–citoplasma. EYA4 partecipa ai programmi di controllo genico dello sviluppo accoppiando l’attività di fosfatasi tirosinica proteica a interazioni che modulano l’attività dei fattori di trascrizione e dei complessi associati alla cromatina. Nella biologia umana, EYA4 è stata collegata a fenotipi sensoriali e cardiaci, con varianti genetiche associate a sordità autosomica dominante e connessioni riportate con processi legati alla cardiomiopatia. I suoi ruoli nella specificazione del destino cellulare e nella trascrizione responsiva allo stress rendono EYA4 un bersaglio utile per analizzare reti regolatorie in modelli cellulari di differenziazione e rilevanti per la malattia.
EYA4 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus EYA4 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di EYA4. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di EYA4. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con EYA4 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.