eRF3a Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-404748

Panoramica

GSPT1 codifica il fattore eucariotico di rilascio 3a (eRF3a), una GTPasi associata ai ribosomi che collabora con eRF1 per guidare la terminazione della traduzione e favorire il riciclo del ribosoma dopo il riconoscimento del codone di stop. Attraverso un’idrolisi di GTP regolata e interazioni con la poly(A)-binding protein e altri fattori della traduzione, eRF3a contribuisce a coordinare la sorveglianza dell’mRNA, la proteostasi e la fedeltà della sintesi proteica. Un controllo alterato della terminazione della traduzione e delle vie di controllo qualità dell’RNA è stato collegato a una deregolazione dei programmi di crescita cellulare e delle risposte allo stress, rendendo GSPT1 un nodo utile per studiare come il controllo traduttivo si interfacci con le reti di segnalazione e omeostasi. Nella ricerca biomedica, la perturbazione di eRF3a può essere sfruttata per indagare i meccanismi di readthrough dei codoni di stop, l’accoppiamento con la degradazione mediata da codoni di stop prematuri (nonsense-mediated decay) e le vulnerabilità che emergono da un mantenimento compromesso del proteoma.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO eRF3a (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene GSPT1 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del GSPT1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto GSPT1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina eRF3a.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di GSPT1 per lo studio della segnalazione di eRF3a, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni GSPT1 critici per la funzione di eRF3a
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di GSPT1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal eRF3a CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal eRF3a CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus GSPT1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal eRF3a Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR eRF3a (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia GSPT1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio GSPT1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.