Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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EPAS-1/HIF-2 alpha Plasmide Double Nickase (m): sc-420183-NIC
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- EPAS-1/HIF-2 alpha Plasmide Double Nickase (m) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il EPAS-1/HIF-2 alpha Double Nickase Plasmid (m) e il EPAS-1/HIF-2 alpha Double Nickase Plasmid (m2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira Epas1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: EPAS-1/HIF-2 alpha Antibody (190b): sc-13596
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
EPAS-1/HIF-2 alpha Plasmide Double Nickase (m) | sc-420183-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
EPAS-1/HIF-2 alpha Plasmide Double Nickase (m2) | sc-420183-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Epas1 codifica EPAS-1/HIF-2α, un fattore di trascrizione sensibile all’ossigeno che forma un eterodimero con ARNT per coordinare l’espressione genica responsiva all’ipossia. In condizioni di bassa tensione di ossigeno, EPAS-1/HIF-2α si accumula e promuove programmi associati ad angiogenesi, eritropoiesi, metabolismo cellulare e fenotipi di tipo staminale attraverso la segnalazione HIF e il crosstalk con le vie di VEGF, EPO e della glicolisi. Nei sistemi murini, l’attività di Epas1 è centrale per lo sviluppo vascolare e l’adattamento fisiologico all’ipossia, con ampia rilevanza per il rimodellamento guidato dall’ipossia in tumori, modelli di danno ischemico e microambienti infiammatori. Una segnalazione EPAS-1/HIF-2α deregolata è ampiamente utilizzata come punto di ingresso meccanicistico per studiare il sensing dell’ossigeno, il controllo trascrizionale e la riprogrammazione metabolica.
EPAS-1/HIF-2 alpha Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Epas1 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Epas1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Epas1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Epas1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.