Emx2 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-420170

Panoramica

EMX2 (empty spiracles homeobox 2) è un fattore di trascrizione con dominio omeobox che controlla la patterning regionale e le decisioni di destino cellulare durante l’embriogenesi, con ruoli di rilievo nello sviluppo del prosencefalo e nell’arealizzazione corticale, nonché nello sviluppo urogenitale e degli arti nel topo. Regola i programmi di espressione genica dello sviluppo legandosi a elementi cis-regolatori e coordinando reti che si interfacciano con la segnalazione dei morfogeni WNT/β-catenina, FGF e BMP, influenzando la proliferazione e la differenziazione dei progenitori e la formazione dei confini tissutali. Alterazioni del dosaggio di Emx2 o della sua attività regolatoria sono state associate ad anomalie del neurosviluppo e a malformazioni strutturali, e un’espressione deregolata di EMX2 è stata riportata in diversi contesti tumorali come marcatore di stati di differenziazione aberranti. Queste caratteristiche rendono Emx2 un nodo utile per studiare il controllo trascrizionale delle vie di sviluppo e la specificazione di linea.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Emx2 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Emx2 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Emx2 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Emx2 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Emx2.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Emx2 per lo studio della segnalazione di Emx2, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Emx2 critici per la funzione di Emx2
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Emx2 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Emx2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal Emx2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Emx2. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Emx2 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR Emx2 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Emx2 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Emx2 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.