ELOVL6 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-413125-ACT

ELOVL6 (proteina 6 dell’elongazione degli acidi grassi a catena molto lunga) è un’elongasi microsomiale degli acidi grassi che catalizza l’estensione di acidi grassi saturi e monoinsaturi C12–C16 verso specie a catena più lunga, come lo stearato (C18:0), all’interno del reticolo endoplasmatico. Modellando il pool cellulare di acil-CoA a catena lunga, ELOVL6 influenza la lipogenesi de novo, la composizione lipidica delle membrane e la biosintesi a valle di glicerolipidi e sfingolipidi. L’attività di ELOVL6 si interseca con reti di segnalazione metabolica, inclusi i programmi trascrizionali guidati da SREBP1 e le risposte allo stress mediate dai lipidi, che modulano la sensibilità all’insulina e l’infiammazione. Un’alterata espressione di ELOVL6 è stata associata a una disregolazione dell’omeostasi lipidica osservata nei fenotipi di malattia metabolica, tra cui steatosi epatica, insulino-resistenza correlata all’obesità e stati di rischio cardiometabolico.

ELOVL6 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di ELOVL6 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

ELOVL6 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus ELOVL6 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione ELOVL6, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di ELOVL6. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus ELOVL6 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da ELOVL6 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via ELOVL6 nelle cellule tumorali con espressione di ELOVL6 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.