Elf-5 Plasmide Double Nickase (h): sc-400931-NIC

ELF5 codifica il fattore di trascrizione della famiglia ETS Elf-5, una proteina che si lega al DNA in modo sequenza-specifico e regola programmi di espressione genica ristretti alla linea cellulare nei tessuti epiteliali. Elf-5 integra segnali provenienti da vie di sviluppo e ormonali per controllare la differenziazione, la progressione del ciclo cellulare e il mantenimento dell’identità epiteliale, influenzando reti trascrizionali coinvolte nell’adesione e nella morfogenesi tissutale. Un’espressione deregolata di ELF5 o un’alterazione dei circuiti regolatori è stata associata a cambiamenti della plasticità epiteliale e a fenotipi invasivi in diversi tumori, rendendolo un nodo utile per studiare il controllo trascrizionale dipendente dal contesto. ELF5 è inoltre studiato in ambito immunitario e infiammatorio, dove i fattori ETS coordinano programmi genici legati alle transizioni di stato cellulare e alla risposta a segnali del microambiente.

Elf-5 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus ELF5 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di ELF5. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di ELF5. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con ELF5 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.