eIF4AII Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-402758

Descripción general

EIF4A2 codifica la helicasa de ARN humana dependiente de ATP eIF4AII, un componente central de la maquinaria de iniciación de la traducción eIF4F que remodela la estructura secundaria de la UTR 5′ para facilitar el escaneo ribosomal dependiente del cap. Al controlar el reclutamiento del ARNm y el reconocimiento del codón de inicio, eIF4AII influye en programas de síntesis proteica tanto globales como selectivos por transcrito, vinculados al crecimiento celular, la adaptación al estrés y la diferenciación. Su actividad se cruza con vías del metabolismo del ARN y con nodos de control translacional que integran señales aguas arriba que afectan a la proliferación y la supervivencia. La iniciación de la traducción desregulada, incluida la función alterada de la familia eIF4A, se implica con frecuencia en la remodelación oncogénica del proteoma y en otros trastornos asociados a una regulación aberrante del ARNm.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO eIF4AII (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen EIF4A2 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del EIF4A2 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de EIF4A2 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína eIF4AII.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en EIF4A2 para la investigación de la señalización de eIF4AII, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de EIF4A2 críticos para la función de eIF4AII
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de EIF4A2 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido eIF4AII CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido eIF4AII CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus EIF4A2. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR eIF4AII (h) y el plásmido HDR eIF4AII (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología EIF4A2 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana EIF4A2 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.