Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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EGFR Plasmide Double Nickase (h): sc-400015-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- EGFR Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il EGFR Double Nickase Plasmid (h) e il EGFR Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira EGFR. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: EGFR Antibody (A-10): sc-373746
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
EGFR Plasmide Double Nickase (h) | sc-400015-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
EGFR Plasmide Double Nickase (h2) | sc-400015-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Il recettore del fattore di crescita epidermico (EGFR) è una tirosin-chinasi recettoriale che regola la proliferazione, la sopravvivenza, la differenziazione e la migrazione cellulare attraverso la dimerizzazione indotta dal ligando e l'autofosforilazione. Una volta attivato, EGFR trasduce il segnale tramite principali vie di segnalazione tra cui RAS–RAF–MEK–ERK (MAPK), PI3K–AKT–mTOR, PLCγ–PKC e JAK–STAT, integrando segnali extracellulari con programmi trascrizionali e metabolici. Nella biologia umana, una segnalazione di EGFR deregolata dovuta a sovraespressione, amplificazione o mutazioni attivanti è spesso associata a fenotipi oncogenici e a una risposta alterata agli stimoli dei fattori di crescita. EGFR partecipa inoltre all'omeostasi dei tessuti epiteliali e alla riparazione delle ferite, rendendolo un nodo centrale per lo studio della dinamica della segnalazione recettoriale, del traffico intracellulare e del crosstalk tra vie di segnalazione.
EGFR Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus EGFR nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di EGFR. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di EGFR. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con EGFR interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.