Eg5 Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-402276-LAC

Eg5, noto anche come membro 11 della famiglia delle chinesine (KIF11), è una proteina motoria basata sui microtubuli essenziale per l’instaurazione e il mantenimento di fusi mitotici bipolari durante la divisione cellulare. Generando forze dirette verso l’esterno che separano i centrosomi e organizzano i microtubuli del fuso, Eg5 favorisce l’allineamento dei cromosomi e una segregazione fedele durante la fase M. La sua attività si integra con il controllo del checkpoint mitotico e con le vie della dinamica dei microtubuli, rendendo la funzione di Eg5 strettamente legata alla capacità proliferativa e alla stabilità del genoma. Un’alterata funzione di Eg5 è associata a un’assemblaggio del fuso disregolato e a instabilità cromosomica, aspetti rilevanti per la biologia delle cellule tumorali e per altri modelli di malattie guidate dalla proliferazione.

Le particelle di attivazione lentivirale Eg5 (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale Eg5 (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione , dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di Eg5. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.