eEF2K Plasmide Double Nickase (h): sc-402166-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- eEF2K Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il eEF2K Double Nickase Plasmid (h) e il eEF2K Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira EEF2K. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: eEF2K Antibody (C-12): sc-390710
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
eEF2K Plasmide Double Nickase (h) | sc-402166-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
eEF2K Plasmide Double Nickase (h2) | sc-402166-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
EEF2K codifica la chinasi dell’eukaryotic elongation factor 2 (eEF2K), una chinasi Ser/Thr dipendente da Ca2+/calmodulina che fosforila eEF2 rallentando la traslocazione ribosomiale e limitando la sintesi proteica durante lo stress cellulare. Agendo a valle delle reti di sensing di nutrienti ed energia, incluse le vie di segnalazione mTOR e AMPK, eEF2K contribuisce a coordinare il controllo della traduzione con l’autofagia e l’adattamento metabolico. Questa via influenza la crescita e la sopravvivenza cellulare e la plasticità sinaptica modulando la traduzione globale e selettiva degli mRNA. Alterazioni dell’attività di eEF2K e della fosforilazione di eEF2 sono state riportate in risposte allo stress associate al cancro e in disturbi neurologici e metabolici, a supporto della sua rilevanza per studi meccanicistici.
eEF2K Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus EEF2K nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di EEF2K. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di EEF2K. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con EEF2K interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.