E2F1 Plasmide Double Nickase (h): sc-400123-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- E2F1 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il E2F1 Double Nickase Plasmid (h) e il E2F1 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira E2F1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: E2F1 Antibody (KH95): sc-251
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
E2F1 Plasmide Double Nickase (h) | sc-400123-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
E2F1 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-400123-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
E2F1 codifica un fattore di trascrizione a specificità di sequenza che integra i segnali mitogeni con la progressione del ciclo cellulare, attivando i geni necessari per la transizione G1/S e per la replicazione del DNA. L’attività di E2F1 è strettamente regolata dalla via di RB1 e dalla segnalazione delle chinasi ciclina-dipendenti, e partecipa a checkpoint che coordinano la proliferazione con l’apoptosi e le risposte al danno al DNA. Una segnalazione di E2F1 deregolata è frequentemente associata a un controllo anomalo del ciclo cellulare e a instabilità genomica, rendendola rilevante per studi sulla trasformazione oncogenica, lo stress replicativo e le reti di oncosoppressori. In quanto effettore a valle delle vie di stress collegate a RB/E2F e p53, E2F1 è ampiamente utilizzato per indagare il controllo trascrizionale della proliferazione e le decisioni sul destino cellulare.
E2F1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus E2F1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di E2F1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di E2F1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con E2F1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.