Plasmide Double Nickase (h) E2F1: sc-400123-NIC

E2F1 code un facteur de transcription spécifique de séquence qui intègre les signaux mitogènes à la progression du cycle cellulaire en activant les gènes nécessaires à la transition G1/S et à la réplication de l’ADN. L’activité d’E2F1 est étroitement régulée par la voie RB1 et la signalisation des kinases dépendantes des cyclines, et elle participe à des points de contrôle qui coordonnent la prolifération avec l’apoptose et les réponses aux dommages de l’ADN. Une signalisation d’E2F1 dérégulée est fréquemment associée à un contrôle anormal du cycle cellulaire et à l’instabilité génomique, ce qui en fait un élément pertinent pour l’étude de la transformation oncogénique, du stress réplicatif et des réseaux de suppresseurs de tumeurs. En tant qu’effecteur en aval des voies de stress liées à RB/E2F et à p53, E2F1 est largement utilisé pour explorer la régulation transcriptionnelle de la prolifération et les décisions de destinée cellulaire.

E2F1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus E2F1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de E2F1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de E2F1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de E2F1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.