Dysbindin Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-430148-ACT

O gene Dtnbp1 de camundongo codifica a disbindina, uma proteína citosólica e endossomal que atua como componente central do complexo BLOC-1, coordenando o tráfego de endossomos para lisossomos, a triagem de cargas e a secreção regulada. A disbindina contribui para a biogênese de vesículas sinápticas e a liberação de neurotransmissores ao influenciar vias vesiculares e a dinâmica de membranas associada à actina, conectando o transporte intracelular à função de circuitos neuronais. Além de suas funções no tecido neural, o tráfego dependente de Dtnbp1 afeta organelas relacionadas a lisossomos e a renovação de receptores, moldando as saídas de sinalização celular. Alterações na expressão ou na função de DTNBP1 têm sido associadas à biologia de doenças neuropsiquiátricas e à disfunção sináptica, sustentando seu uso em estudos mecanísticos de vias relevantes para o cérebro.

Dysbindin O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Dtnbp1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Dysbindin O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Dtnbp1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Dtnbp1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Dysbindin. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Dtnbp1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Dysbindin no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Dysbindin em células tumorais com expressão de Dtnbp1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.