DYNC2H1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-406180

Panoramica

DYNC2H1 codifica la catena pesante della dineina citoplasmatica 2, il principale motore retrogrado del macchinario di trasporto intraflagellare (IFT) che consente il traffico dalla punta del ciglio alla base. Accoppiando la motilità guidata dall’ATP ai complessi IFT-A e agli adattatori di carico, DYNC2H1 è essenziale per l’assemblaggio e il mantenimento delle ciglia primarie e per la trasduzione del segnale dipendente dalle ciglia, incluse le dinamiche della via Hedgehog. L’alterazione di DYNC2H1 compromette la struttura ciliare e modifica gli output della segnalazione durante lo sviluppo, collegando il gene alle ciliopatie umane caratterizzate da fenotipi scheletrici e dello sviluppo. Queste funzioni rendono DYNC2H1 un nodo utile per studiare la biologia delle ciglia, il trasporto degli organelli e i programmi trascrizionali regolati dalle vie di segnalazione.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO DYNC2H1 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene DYNC2H1 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del DYNC2H1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto DYNC2H1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina DYNC2H1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di DYNC2H1 per lo studio della segnalazione di DYNC2H1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni DYNC2H1 critici per la funzione di DYNC2H1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di DYNC2H1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal DYNC2H1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal DYNC2H1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus DYNC2H1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal DYNC2H1 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR DYNC2H1 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia DYNC2H1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio DYNC2H1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.