Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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Dynamin II Plasmide Double Nickase (h): sc-401037-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- Dynamin II Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il Dynamin II Double Nickase Plasmid (h) e il Dynamin II Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira DNM2. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: Dynamin II Antibody (G-4): sc-166669
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
Dynamin II Plasmide Double Nickase (h) | sc-401037-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Dynamin II Plasmide Double Nickase (h2) | sc-401037-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
DNM2 codifica per la Dinamina II, una grande GTPasi che catalizza la scissione di membrana durante l’endocitosi mediata da clatrina e altri eventi di traffico vescicolare. Attraverso interazioni con i fosfoinositidi e con proteine contenenti domini SH3, la Dinamina II coordina l’internalizzazione dei recettori, il riciclo delle vescicole sinaptiche e la dinamica degli endosomi, collegando il rimodellamento di membrana all’organizzazione del citoscheletro di actina. L’attività di DNM2 influenza le vie di segnalazione controllando il traffico e il turnover dei recettori di superficie, con effetti a valle su proliferazione, migrazione e omeostasi cellulare. Varianti e deregolazione di DNM2 sono associate a fenotipi neuromuscolari e neurodegenerativi e sono ampiamente studiate nel contesto di difetti del traffico di membrana e anomalie del citoscheletro.
Dynamin II Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus DNM2 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di DNM2. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di DNM2. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con DNM2 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.