DUSP22 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-430587

Panoramica

Dusp22 codifica la fosfatasi a doppia specificità 22 (DUSP22), una fosfatasi MAPK atipica che modula la segnalazione dipendente dalla fosforilazione defosforilando residui di serina/treonina e di tirosina su specifici substrati. Nelle cellule immunitarie e non immunitarie del topo, DUSP22 è stata collegata alla regolazione della dinamica della via MAPK, inclusi nodi di segnalazione sensibili allo stress e ai mitogeni che determinano output trascrizionali come programmi citochinici, soglie di attivazione e apoptosi. Attraverso il suo impatto sull’equilibrio chinasi–fosfatasi, DUSP22 influenza decisioni di proliferazione e differenziamento cellulare che risultano spesso alterate nelle condizioni infiammatorie e nella biologia del cancro. Alterazioni nella segnalazione mediata da DUSP22 sono state associate a disregolazione immunitaria e a un rimodellamento oncogenico delle vie di segnalazione, rendendola rilevante per studi meccanicistici di fenotipi dipendenti dalla segnalazione.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO DUSP22 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Dusp22 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Dusp22 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Dusp22 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina DUSP22.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Dusp22 per lo studio della segnalazione di DUSP22, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Dusp22 critici per la funzione di DUSP22
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Dusp22 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal DUSP22 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal DUSP22 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Dusp22. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal DUSP22 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR DUSP22 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Dusp22 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Dusp22 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.