DUOX2 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-403534-ACT

DUOX2 codifica la dual ossidasi 2, un membro della famiglia delle NADPH ossidasi che genera perossido di idrogeno a livello della membrana plasmatica e lungo le vie secretorie, sostenendo la segnalazione redox epiteliale e la maturazione ossidativa delle proteine. L’attività di DUOX2 contribuisce alla difesa mucosale innata e alla segnalazione infiammatoria fornendo H2O2 per reazioni antimicrobiche mediate da perossidasi e modulando vie sensibili alle ROS, come NF-κB e le reti di citochine. Nella tiroide, l’H2O2 derivato da DUOX2 è necessario per l’organificazione dello ioduro e la iodazione della tireoglobulina, collegando questo enzima alla biosintesi ormonale. Un’alterata espressione o funzione di DUOX2 è stata associata alla disormonogenesi tiroidea e a fenotipi infiammatori epiteliali rilevanti per modelli di malattie gastrointestinali e delle vie aeree.

DUOX2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di DUOX2 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

DUOX2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus DUOX2 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione DUOX2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di DUOX2. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus DUOX2 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da DUOX2 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via DUOX2 nelle cellule tumorali con espressione di DUOX2 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.