DPF2 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-404801-ACT

DPF2 (noto anche come REQU) codifica una proteina a dita di zinco che funge da lettore epigenetico all’interno di complessi di rimodellamento della cromatina dipendenti da ATP, inclusi SWI/SNF (BAF/PBAF). Tramite i suoi domini PHD, DPF2 riconosce le modifiche delle code istoniche e contribuisce a coordinare programmi di rimodellamento dei nucleosomi che influenzano il controllo trascrizionale, la specificazione di linea cellulare e l’espressione genica in risposta agli stimoli. DPF2 è stato collegato alla regolazione della trascrizione associata a NF-κB e, più in generale, al controllo della proliferazione e della differenziazione cellulare mediato dalla cromatina. Un’attività deregolata della via SWI/SNF e un’alterata funzione dei lettori della cromatina che coinvolge DPF2 sono temi ricorrenti nella biologia dei tumori e delle malattie infiammatorie, rendendolo un nodo utile per studi meccanicistici dei circuiti trascrizionali.

DPF2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di DPF2 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

DPF2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus DPF2 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione DPF2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di DPF2. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus DPF2 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da DPF2 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via DPF2 nelle cellule tumorali con espressione di DPF2 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.