DP2 Plasmide Double Nickase (h): sc-404990-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- DP2 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il DP2 Double Nickase Plasmid (h) e il DP2 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira PTGDR2. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: DP2 Antibody (C-5): sc-271898
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
DP2 Plasmide Double Nickase (h) | sc-404990-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
DP2 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-404990-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
PTGDR2 codifica DP2 (noto anche come CRTH2), un recettore accoppiato a proteine G che lega la prostaglandina D2 e mediatori lipidici correlati per regolare la chemiotassi, l’attivazione e i programmi citochinici nelle cellule immunitarie di tipo 2, inclusi i linfociti Th2, gli eosinofili e i basofili. La segnalazione di DP2 coinvolge vie dipendenti dall’AMPc e effettori a valle quali i moduli MAPK e PI3K, modellando il reclutamento delle cellule infiammatorie e la funzione effettrice sulle superfici mucosali. Questo asse è spesso studiato nel contesto dell’infiammazione allergica e di una più ampia disregolazione immunitaria, in cui un’alterata segnalazione delle prostaglandine può influenzare il traffico leucocitario e il rimodellamento tissutale. In quanto recettore di membrana con una segnalazione definita guidata dal ligando, DP2 rappresenta un nodo maneggevole per analizzare la comunicazione mediata dagli eicosanoidi tra compartimenti stromali e immunitari.
DP2 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus PTGDR2 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di PTGDR2. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di PTGDR2. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con PTGDR2 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.