Dok-1 Plasmide Double Nickase (h): sc-401398-NIC

Il gene umano **DOK1** codifica **Dok-1**, una proteina citoplasmatica di docking/adattatrice che viene fosforilata su tirosina a valle di tirosin-chinasi recettoriali e non recettoriali e assembla complessi di segnalazione inibitori. Attraverso interazioni con partner contenenti domini SH2/SH3, Dok-1 modula vie tra cui Ras/MAPK e PI3K/AKT per limitare la segnalazione mitogena e di sopravvivenza, influenzando adesione, migrazione e risposte delle cellule ematopoietiche. Nelle linee immunitarie e mieloidi, Dok-1 contribuisce al controllo a feedback negativo della segnalazione di citochine e fattori di crescita e può influenzare la progressione del ciclo cellulare e i programmi di differenziamento. Un’espressione o una segnalazione deregolate di DOK1 sono state associate ad alterazioni dell’attività delle reti di tirosin-chinasi nel cancro e a perturbazioni in contesti di segnalazione immunitaria, supportandone l’impiego in studi di via e di meccanismo.

Dok-1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus DOK1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di DOK1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di DOK1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con DOK1 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.