DNA-PKCS Plasmide Double Nickase (m): sc-422405-NIC
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- DNA-PKCS Plasmide Double Nickase (m) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il DNA-PKCS Double Nickase Plasmid (m) e il DNA-PKCS Double Nickase Plasmid (m2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira Prkdc. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: DNA-PKCS Antibody (G-12): sc-390849
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
DNA-PKCS Plasmide Double Nickase (m) | sc-422405-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
DNA-PKCS Plasmide Double Nickase (m2) | sc-422405-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Prkdc codifica la subunità catalitica della protein chinasi DNA-dipendente, DNA-PKCS, un regolatore centrale della riparazione delle rotture a doppio filamento del DNA tramite la via del non-homologous end joining (NHEJ). DNA-PKCS forma un oloenzima attivo con Ku70/Ku80 per coordinare il riconoscimento delle estremità, la sinapsi e l’elaborazione delle estremità, e partecipa alla ricombinazione V(D)J e alla ricombinazione di class switch nei linfociti in sviluppo. In quanto componente chiave della risposta al danno al DNA, DNA-PKCS influenza la segnalazione dei checkpoint del ciclo cellulare, la stabilità del genoma e la sensibilità cellulare allo stress genotossico. L’alterazione della funzione di PRKDC è comunemente utilizzata per modellare difetti nell’NHEJ, fenotipi di instabilità cromosomica e i meccanismi alla base delle vulnerabilità della riparazione del DNA rilevanti per immunodeficienza e cancro nei sistemi murini.
DNA-PKCS Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Prkdc nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Prkdc. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Prkdc. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Prkdc interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.