DMRT1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-424507

Panoramica

Dmrt1 codifica DMRT1, un fattore di trascrizione conservato contenente un dominio di legame al DNA di tipo DM che regola i programmi di determinazione e differenziazione sessuale nella gonade del topo. DMRT1 è essenziale per il mantenimento postnatale del testicolo, poiché promuove l’identità delle cellule del Sertoli, coordina lo sviluppo delle cellule germinali e reprime l’attivazione inappropriata di vie ovariche, inclusa l’antagonizzazione di reti guidate da FOXL2. La sua attività si integra con il controllo trascrizionale e basato sulla cromatina della meiosi, della differenziazione degli spermatogoni e della segnalazione somatico–germinale all’interno dell’epitelio seminifero. L’alterazione o la disregolazione dei programmi associati a DMRT1 è collegata a disturbi dello sviluppo sessuale, compromissione della spermatogenesi e disgenesia gonadica, rendendolo un nodo chiave per studi meccanicistici della biologia riproduttiva.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO DMRT1 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Dmrt1 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Dmrt1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Dmrt1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina DMRT1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Dmrt1 per lo studio della segnalazione di DMRT1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Dmrt1 critici per la funzione di DMRT1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Dmrt1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal DMRT1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal DMRT1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Dmrt1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal DMRT1 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR DMRT1 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Dmrt1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Dmrt1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.