DIO1 Plasmide Double Nickase (h): sc-405162-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- DIO1 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il DIO1 Double Nickase Plasmid (h) e il DIO1 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira DIO1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: DIO1 Antibody (B-7): sc-515198
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
DIO1 Plasmide Double Nickase (h) | sc-405162-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
DIO1 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-405162-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
DIO1 codifica la deiodinasi di tipo I delle iodotironine, un selenoenzima che catalizza la deiodinazione dell’anello esterno e di quello interno degli ormoni tiroidei, convertendo la tiroxina (T4) nella triiodotironina (T3) bioattiva e regolando la disponibilità locale di ormoni tiroidei. Questa attività sostiene l’omeostasi endocrina e modella i programmi trascrizionali controllati dai recettori degli ormoni tiroidei, collegando la funzione di DIO1 al tasso metabolico, al metabolismo di lipidi e carboidrati e a processi cellulari sensibili allo stato redox. L’espressione di DIO1 è marcata in fegato e rene ed è modulata dallo stato nutrizionale e da segnali ormonali che influenzano le dinamiche della segnalazione tiroidea. Un’attività deiodinasica disregolata è associata a profili alterati degli ormoni tiroidei osservati nei disturbi tiroidei e in perturbazioni metaboliche sistemiche, rendendo DIO1 un bersaglio rilevante per studi meccanicistici delle vie dipendenti dagli ormoni.
DIO1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus DIO1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di DIO1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di DIO1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con DIO1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.