Dermcidin Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-401346-ACT

Il gene umano **DCD** codifica la dermcidina, un precursore peptidico secreto altamente espresso nelle ghiandole sudoripare eccrine, che viene processato proteoliticamente in frammenti antimicrobici e bioattivi. I peptidi derivati dalla dermcidina contribuiscono alla difesa innata di barriera alterando le membrane microbiche e modulando i microambienti cutanei e mucosali, mentre altri frammenti sono stati collegati alle risposte allo stress cellulare e ai segnali di sopravvivenza. Un’espressione alterata di **DCD** è stata riportata in contesti infiammatori e in molteplici tipi di tumore, dove è associata a cambiamenti nella proliferazione, nella tolleranza allo stress ossidativo e nelle interazioni tra tumore e microambiente. Queste caratteristiche rendono **DCD** un nodo utile per studiare l’omeostasi epiteliale, la biologia dei peptidi secreti e la regolazione del microambiente rilevante per il rimodellamento associato alla malattia.

Dermcidin Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di DCD senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Dermcidin Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus DCD nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione DCD, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Dermcidin. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus DCD nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Dermcidin nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Dermcidin nelle cellule tumorali con espressione di DCD silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.