DDX11 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-418103

Panoramica

DDX11 (elicasi DEAD/H-box 11), noto anche come ChlR1, è un’elicasi del DNA che sostiene la stabilità del genoma promuovendo la coesione tra cromatidi fratelli e un’efficiente replicazione del DNA. Partecipa alla riparazione del DNA accoppiata alla replicazione e alla progressione della forcella replicativa, intersecandosi con l’instaurazione della coesione e con vie più ampie della risposta al danno al DNA. L’attività di DDX11 contribuisce a prevenire rotture cromosomiche e aneuploidia associate allo stress replicativo, collegando la sua funzione ai meccanismi che salvaguardano la segregazione dei cromosomi. La perturbazione genetica o la disfunzione di DDX11 è associata a fenotipi di instabilità genomica legati alla coesina, inclusa la sindrome da rotture di Varsavia, rendendolo rilevante per lo studio dei difetti di coesione e del danno al DNA associato alla replicazione.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO DDX11 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene DDX11 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del DDX11 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto DDX11 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina DDX11.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di DDX11 per lo studio della segnalazione di DDX11, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni DDX11 critici per la funzione di DDX11
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di DDX11 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal DDX11 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal DDX11 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus DDX11. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal DDX11 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR DDX11 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia DDX11 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio DDX11 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.