D3DR Plasmide Double Nickase (h): sc-402172-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- D3DR Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il D3DR Double Nickase Plasmid (h) e il D3DR Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira DRD3. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: D3DR Antibody (9F4): sc-136170
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
D3DR Plasmide Double Nickase (h) | sc-402172-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
D3DR Plasmide Double Nickase (h2) | sc-402172-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
DRD3 codifica il recettore dopaminergico D3 (D3DR), un GPCR accoppiato a Gi/o che modula l’attività dell’adenilato ciclasi, riduce il cAMP intracellulare e influenza a valle la segnalazione mediata da PKA, la conduttanza dei canali ionici e le risposte della via MAPK. D3DR partecipa alla neurotrasmissione dopaminergica e al crosstalk tra recettori che modella la plasticità sinaptica, l’eccitabilità neuronale e la segnalazione neuroendocrina. Alterazioni dell’espressione o della segnalazione di DRD3 sono state associate a meccanismi di malattie neuropsichiatriche e neurodegenerative, inclusa la disregolazione dei processi di ricompensa, della cognizione e del controllo motorio. In quanto recettore di superficie con output di segnalazione farmacologicamente modulabili, DRD3 è ampiamente studiato per la mappatura delle vie di segnalazione, il traffico recettoriale e il bias di segnale in modelli cellulari umani.
D3DR Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus DRD3 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di DRD3. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di DRD3. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con DRD3 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.