Cytokeratin 19 Plasmide Double Nickase (h): sc-400281-NIC

KRT19 codifica la citocheratina 19, una proteina dei filamenti intermedi di tipo I che contribuisce all'organizzazione del citoscheletro epiteliale, alla stabilità meccanica della cellula e al mantenimento della polarità. La citocheratina 19 partecipa ai processi di assemblaggio e rimodellamento dei filamenti di cheratina, coordinandosi con l'adesione cellulare e con i complessi giunzionali, influenzando la differenziazione epiteliale e le risposte allo stress. L'alterazione dell'espressione di KRT19 è spesso utilizzata come indicatore molecolare della linea epiteliale e dei cambiamenti di stato cellulare osservati durante la displasia, lo switching fenotipico associato all'invasione e la disseminazione metastatica. Nella ricerca sulle malattie umane, KRT19 viene comunemente analizzato nel contesto dell'eterogeneità tumorale, della regolazione dei marker epiteliali e dei programmi di segnalazione legati a migrazione e sopravvivenza.

Cytokeratin 19 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus KRT19 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di KRT19. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di KRT19. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con KRT19 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.