Cytokeratin 10 Plasmide Double Nickase (h): sc-400193-NIC

KRT10 codifica la citocheratina 10, una proteina dei filamenti intermedi di tipo I che si associa alla cheratina 1 per formare la rete di cheratine sovrabasali negli epiteli stratificati. Questo sistema filamentoso conferisce resistenza meccanica, sostiene l'adesione cellula-cellula mediata dai desmosomi e contribuisce alla differenziazione terminale e alla formazione della barriera epidermica. L'espressione di KRT10 è strettamente legata ai programmi di maturazione dei cheratinociti e al cross-talk con vie di differenziazione calcio-dipendenti e con i pathway di risposta allo stress che rimodellano il citoscheletro. L'alterazione genetica o la deregolazione dell'espressione di KRT10 è associata a disordini ereditari della cornificazione, inclusa l'ittiosi epidermolitica, ed è frequentemente utilizzata come marcatore di differenziazione epiteliale alterata in modelli di malattie dermatologiche.

Cytokeratin 10 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus KRT10 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di KRT10. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di KRT10. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con KRT10 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.